1，血清中可能出现的沉淀物是什么？
基于HyClone公司的经验以及多年的试验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：:( 1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm的，可以用肉眼观察到。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染;（3）胆固醇，脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
2，血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响？
（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。（2）过滤，如果血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。一般说来，因为在血清生产时最后已经经过100纳米或者40纳米的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此海克隆不推荐再过滤用于细胞培养的血清。在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此 就更加确认是血清被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
3、如何避免血清中沉淀物的出现？
首先要注意正确的血清解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：（1）热灭活血清；（2）在37℃下培养血清；（3）反复冻融；（4）γ射线照射；（5）长期储存在2-8℃；（6）在室温下放置时间过长
4、如何去除血清中的沉淀？
如想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装到无菌离心管中，以400g离心，上清液即可直接加入到培养基内一起过滤。注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。
5、 冷冻管应如何解冻？
取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
6、细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？
除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
7、客户拿到细胞后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
我们寄的细胞一般是T25的，客户收到细胞可以观察细胞密度，如果长到70-90%就可以传代养了，没有的话可以继续将T25放到孵化箱中培养
8、可否使用与原先培养条件不同之培养基？
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
9.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性
10.培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5CO2培养细胞。
11.培养基中是否须添加抗生素
除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素
12.DMSO之等级和无菌过滤之方式为何
冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissueculturegrade之DMSO(如SigmaD2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜
13.冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30-0分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些
14.细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜
15.应如何避免细胞污染
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法
16.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因
实验人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久
