当前位置:首页 > 产品中心 > 细胞库 > 小鼠胚胎干细胞E14

小鼠胚胎干细胞E14

产品编号:SC0712
品牌:yuchicell
价格:¥1,800 元
CAS号:提供种属鉴定
规格:1*(10^6)
包装:T25/1mL冻存管
到货期:冻存现货/可免费提供复苏服务

种属

小鼠

组织来源

129/Ola品系,胚胎内细胞团

传代比例/细胞消化

1:2传代,消化1-2分钟

完全培养基配置

DMEM培养基;15%胎牛血清;1%谷氨酰胺;1%非必需氨基酸;1%丙酮酸钠 ;0.5 mL β-巯基乙醇 ;5g LIF ;1%双抗

简介

小鼠胚胎干细胞。该细胞缺乏 HGPRT(HPRT),并且对 0.06 mM 的 6-硫鸟嘌呤有抗性。当在饲养层(胚胎成纤维细胞或 STO 细胞)上培养时,细胞保持未分化状态。在没有饲养层的情况下,细胞自发分化并形成胚胎结构。当注入胚泡中时,细胞可以进入生殖系。在常规的分子基因修饰技术之后,它们可用于重构小鼠胚胎。培养时需使用昆明白MEF作为饲养层细胞。

形态

球形克隆

生长特征

贴壁生长

培养条件

气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

冻存条件

冻存液:90%FBS,DMSO 10%,

或使用非程序冻存液

产品使用

仅限于科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

细胞处理:

MEF 细胞铺制:

1. 在 T25 培养瓶中加入 0.2%明胶,摇匀后覆盖底面即可,于 37℃细胞培养箱至少放置 15 min 以上。

2. 吸除 0.2%明胶,加入事先水浴加热至 37℃的 MEF 完全培养液。一般地,一个 T25 培养瓶中加入 5 ml MEF 完全培养液。

3.  按实验需要:小鼠胚胎干细胞使用 KM-r P3 MEF 或 CF-1 P3 MEF;复苏 MEF 细胞若干支。将冻存管从液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁,防止污染。

4. 将冻存管内细胞悬液转移至含 2 ml MEF 完全培养液的 15 ml 离心管内,以1000 rpm,离心 5 min,离心后将上清液吸除,另加入新鲜的 MEF 完全培养液 1 ml,重悬后按照一个 T25 培养瓶铺 1´10^6 的 MEF 细胞,平均加入到 T25 培养瓶中,轻轻摇匀后置于 37℃细胞培养箱。24 h 以后可以传入小鼠胚胎干细胞。

5.复苏或传代小鼠胚胎干细胞前,将 T25 培养瓶中的 MEF 完全培养液吸除,加入 2 ml 小鼠胚胎干细胞完全培养液轻轻冲洗一遍后吸除,加入新鲜的小鼠胚胎干细胞完全培养液待用。

复苏:

1.将小鼠胚胎干细胞冻存管从液氮中取出,置于 37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超净台内用 75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁,防止污染。

2. 将冻存管内细胞悬液转移至含 3-4 ml 小鼠胚胎干细胞完全培养液的 15ml 离心管内,以 1000 rpm,离心 5 min。

3. 离心后将上清液吸除,另加入新鲜的小鼠胚胎干细胞完全培养液 2 ml,吹打悬浮。

4. 重复吹打,制成单细胞悬液,尽量避免气泡。

5.  转移至 1 个已经铺好 MEF 细胞的 T25 培养瓶中培养。

6. 每天更换小鼠胚胎干细胞完全培养液。

传代:

1. 一般在复苏后第 2-3 天传代,视克隆大小和密度而定

2. 吸除废液。

3. 用 PBS(不含钙镁离子)轻轻冲洗一遍。

4. 加入 1.0 ml 的 0.25%胰酶(含 EDTA)至培养瓶,轻轻晃动,使胰酶覆盖底面,置于 37℃培养箱内消化细胞。

5. 在显微镜下观察,直至细胞层全部脱落(一般需要 1-2 min)。

6.  加 2 ml 小鼠胚胎干细胞完全培养液终止消化。

7.  以 1000 rpm,离心 5 min,弃上清。

8. 加入约 1 ml 小鼠胚胎干细胞完全培养液,多次轻轻吹打细胞, 制成单细胞悬液。

9. 加入足量的小鼠胚胎干细胞完全培养液,吹打混匀,细胞悬液分装到铺好 MEF 细胞的 T25 培养瓶中。一般地,一个 T25 培养瓶加入 5-6 ml 培养液。放入 37℃培养箱内培养。每天换液。

传代比例:1:4-1:7

冻存:

1.按传代的方法将细胞消化下来,制成细胞悬液。

2.  以 1000 rpm,离心 5 min,弃上清,逐滴加入已经预冷的冻存液,悬浮细胞。

3. 按每支存管内加入 500 ml 细胞悬液分装到冻存管内,标记细胞名称、代数、冻存日期等基本信息。

4.将冻存管置于程序降温盒内,-80℃过夜,转入液氮。

冻存液配方:

小鼠胚胎干细胞完全培养液 60%,ES 级 FBS 30%,DMSO 10%

附:小鼠胚胎干细胞与 MEF 细胞分离的简易方法(差速贴壁法):

1.培养中的小鼠胚胎干细胞,按传代的操作方法将细胞用胰酶消化并吹打成单细胞悬液后,加入适量的提前温育好的小鼠胚胎干细胞完全培养液重悬细胞, 吹打混匀,细胞悬液分装到无 MEF 细胞的培养皿或培养瓶(一般地,一个T25 培养瓶中培养的小鼠胚胎干细胞,在一个 10 cm 培养皿中进行差速贴壁。不要事先铺明胶,如铺明胶则细胞贴壁速度过快无法有效分离小鼠胚胎干细胞与 MEF 细胞)中。

2. 培养皿或培养瓶置于 37°C 培养箱内静置 1 小时。

3.  1 小时后,绝大部分 MEF 细胞已贴在培养皿或培养瓶底面,而大部分小鼠胚胎干细胞仍然悬浮在培养液中。收取培养液,进行后续实验。


相关产品
品牌 产品名称 产品编号 CAS号 规格 包装 到货期 市场价
yuchicell 人肺癌细胞耐药株A549-5Fu SC0625 提供STR鉴定报告 1*(10^6) T25/1mL冻存管 冻存现货/可免费提供复苏服务 ¥3,500 元
yuchicell 人胃癌细胞带荧光素酶MKN-45/LUC SC0580 提供STR鉴定报告 1*(10^6) T25/1mL冻存管 冻存现货/可免费提供复苏服务 ¥3,500 元
yuchicell 人CD4+T细胞 SC1325 使用非接触的免疫磁珠标记单个核细胞,从中分离获得 CD4+ T 细胞 2X 10 6 cells/管 冻存株 1 管 现货 干冰运输 ¥4,050 元
yuchicell 人乳腺腺癌细胞;SK-BR-3 SC0134 提供STR鉴定报告 1*(10^6) T25 冻存现货/可免费提供复苏服务 ¥1,500 元
yuchicell 人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83 SC0632 提供STR鉴定报告 1*(10^6) T25/1mL冻存管 冻存现货/可免费提供复苏服务 ¥2,500 元
yuchicell GL261-GFP SC0715 种属鉴定正确 1*(10^6) T25/1mL冻存管 ¥3,500 元
yuchicell 人结肠癌细胞;COLO205 SC0017 提供STR鉴定报告 1*(10^6) T25 冻存现货/可免费提供复苏服务 ¥1,600 元
yuchicell 人Burkkit淋巴瘤细胞带荧光素酶Daudi/LUC SC0592 提供STR鉴定报告 1*(10^6) T25/1mL冻存管 冻存现货/可免费提供复苏服务 ¥3,500 元
yuchicell 人CD8+ T 细胞 SC1326 使用非接触的免疫磁珠标记单个核细胞,从中分离获得 CD8+ T 细胞。 2m/5m/10m 冻存株 1 管, 现货 干冰运输 ¥8,000 元
首页
电话
短信
联系